CCK-8河北快三走势图表

使用说明书

仅供体外研究使用,不用于临床诊断!

第1版(2016年04月修订)

[产品信息]

WST-8【化学名:2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐】,它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯(1-Methoxy PMS)的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物,生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比。CCK-8河北快三走势图表是一款基于WST-8显色为基本原理,广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速、高灵敏度检测河北快三走势图表。

[试剂组分]

组分

IS087-1(100次装)

IS087-2(200次装)

IS087-3(500次装)

CCK8溶液

1ml

2ml

5ml

使用说明书

一份

[适用范围]

药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验。

[储存及有效期]

-20℃避光保存,一年有效。

[实验操作]

1. 取生长状态良好的细胞制备成一定浓度的细胞悬液,每孔100ul加入96孔细胞培养板中。根据实验需求,在培养孔中加入0-10ul待测的药物继续培养。

2. 将河北快三走势图表中的CCK-8溶液取10ul加入96孔细胞培养板,在37℃培养箱中继续孵育0.5-4小时。

3. 在450nm测定吸光度。建议采用双波长进行测定,检测波长430-490nm,参比波长600-650nm。

[注意事项]

1. 通常细胞增殖实验每孔加入2000个/100ul 细胞,细胞毒性实验每孔加入5000/100ul 个细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小、细胞增殖速度的快慢等因素决定)。

2. 如果是贴壁细胞,需要37℃培养箱进行预培养2-4小时等细胞贴壁后再开展实验,如果是悬浮细胞,不需要预培养。

3. 如果是做细胞毒性试验,加入毒性物质后的培养时间需要摸索。要看毒性物质的性质和细胞的敏感性,一般要根据细胞周期来决定,起码要一代以上的时间。

4. 如果细胞起始的培养体积为200ul,则需加入20ul的CCK-8溶液,其它情况以此类推。

5. 建议每个药物浓度孔设置3个复制孔,最后取均值做曲线。

6. 设计好实验对照,尽量排除其它因素的干扰:1)空白对照:可以用加了等量细胞培养液、CCK-8溶液和药物但没有加细胞的孔;2)阴性对照:不加药物但加了药物溶剂的细胞孔。

7. 本河北快三走势图表的检测依赖于脱氢酶催化的反应,如果待测物质有氧化性或还原性,可能会干扰检测,需设法去除(加入CCK-8溶液之前更换新鲜培养基,去掉药物影响。如果药物影响比较小的情况下,可以不更换培养基,直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可)。

8. 加入CCK-8溶液后注意孵育时间。对于大多数情况孵育1小时就可以了。时间的长短根据细胞的类型和细胞的密度等实验情况而定,初次实验时可以在0.5、1、2和4小时后分别用酶标仪检测,然后选取吸光度范围比较适宜的一个时间点用于后续实验。

9. 当在培养箱内培养时,培养板最外一圈的孔最容易干燥挥发,由于体积不准确而增加误差。一般情况下,最外一圈的孔只加培养基,不作为测定孔用。

10. 若暂时不测定OD值,可以向每孔中加入10ul 10% SDS溶液终止反应,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定,吸光度不会变化太大,一般还是建议立刻检测。

11. 用酶标仪检测前需确保每个孔内没有气泡,否则会干扰测定。


  • CCK-8 Kit
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